MiR-339-5p Regulates the Growth, Colony Formation and Metastasis of Colorectal Cancer Cells by Targeting PRL-1
2017-02-06 16:31:31 0 举报
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一篇文献的实验方法
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大纲/内容
利用荧光素酶报告系统检测PRL-1与miRNA结合情况，确实为直接作用的靶基因
通过TargetScan，Pictar，microRNA.ORG预测其靶基因
30例结直肠癌组织标本及其配对的正常组织microRNA-339-5p/3p
阳离子脂质体法，miR-339-5p/3p inhibitor HCT116
CCK8，周期，transwell
实验方法
tanswell检测迁移和侵袭
荧光定量PCR，WB检测顺转过表达SW620，干扰表达HCT116中靶基因PRL-1的mRNA及蛋白表达变化
荧光定量PCR检测其靶基因PRL-1在6株癌细胞中的表达
SW480，SW620，HT29，LOVO，HCT116，LS174T6
荧光定量RT-PCR
扩增包含PRL-1 3，UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体，并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-PRL-Mut载体
miR-339-5p/3p靶基因的预测，验证及相关通路分子检测
裸鼠成瘤实验
阳离子脂质体将miR mimics顺转SW620
病毒包装后感染SW620细胞
通过流式细胞仪分选鉴定稳定过表达miR-339-5p/3p的结直肠癌细胞株SW620-PLVTHM/pre-miR-339
miR-339-5p/3p在结直肠癌组织及细胞的表达
miR-339-5p/3p生物学特性
设计并构建慢病毒表达载体 PLVTHM-pre-MiR-339
CCK8，平板克隆形成实验，流式细胞术检测周期检测pre-miR-339过表达对增殖的影响
WB检测ERK1/2及P-ERK1/2
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