盒子
2017-11-21 22:01:24 3 举报生物化学实验
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大纲/内容
进行定量检测和琼脂凝胶电泳鉴定
去蛋白
收集
培养细胞
收集细胞
向吸附柱中加入700μl 漂洗液W2， 13000rpm离心1min ，弃滤液。重复步骤8一次。空柱13000rpm离心2min，然后室温放置3-5min，使残留乙醇挥发
加入250μl 溶液S2，颠倒6～10次混匀（不要剧烈振荡），直到溶液变得清亮.
加入500μl去蛋白液(W1)，13000rpm离心1min，弃滤液
将吸附柱放于收集管中，将上一步所得上清液加入吸附柱中，13000rpm离心3min，弃滤液。
上柱
离心
复性
13000rpm离心10min，小心取上清液（700-800μl ）。
碱变性
检测
漂洗
取1.5ml培养物加入Eppendorf管中9000rpm×30 s，弃上清
加入400μl 溶液S3，立即温和混匀，室温放置3-5min。13000rpm离心10min，小心取上清液（700-800μl ）。
取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间加50μl洗脱缓冲液(Eluent)，室温放置1min，13000rpm离心1min洗脱质粒DNA
加入250μl 溶液S1，吹打，使细菌沉淀分散，彻底悬浮。
重悬浮细胞，裂解
定量检测：记录OD260值，通过计算确定DNA浓度，公式如下:质粒DNA(g /ml)=50×(OD260) × 稀释倍数
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