酵母细胞融合
2018-01-03 02:33:34 0 举报
酵母细胞融合
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大纲/内容
分别离心收集菌体悬浮在1 mol/L山梨醇
季也蒙假丝酵母
镜检酶解效果和原生质体产率
无菌条件下分别在完全培养液中振荡培养至指数期
注入融合室
将沉淀悬浮于10%聚乙二醇、1 mol/L山梨醇和10 mmol/LCaCL2以及去离子水
加入1% 蜗牛酶液在37℃ 进行酶解
离心，取沉淀
静置5-20 min，将原生质体吸出，对融合子进行检出和鉴定
酿酒酵母
酿酒酵母原生质体悬浮液
1：1等量混合
将融合小室两极与CH—401的高压脉冲（脉冲强度18KV/cm脉冲时程10us 脉冲个数为3 脉冲间隔为1）相接
酿酒酵母细胞不利用再生培养中的D-木糖或纤维二糖，季也蒙假丝酵母为精氨酸缺陷型，不能在再生培养基中也生长，只有两亲本的融合体才能连续传代，经多代选育后得到稳定的能用木糖或纤维二糖产乙醇。
季也蒙假丝酵母原生质体悬浮液
启动融合仪，进行电诱导融合
酶解后，用稳定液洗涤原生质体三次
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