技术路线图
2022-10-12 21:28:19 0 举报实验方法技术路线图
作者其他创作
大纲/内容
6.预测在Meth背景下与ROS相关的转录因子表达的变化
WB/免疫细胞化学方法
使用iRegulon和TRANSFAC检测被Meth上调以及被NAC共同处理而抑制的基因中的转录因子结合基序的频率，对 RNAPol的募集变化进行可视化处理。
体外建立MA使用障碍（MUD) 动物模型
4.测试在Tat增强了氧化还原的背景下， 由Meth诱导的ROS是否能够导致炎症基因的转录增加？
斯金纳箱实验：测量主动杠杆按压次数来评估线索诱导的药物寻找行为
CHIP-Seq/生信分析
Meth诱导的炎症基因转录通过ROS信号传导发生，并通过HIV Tat增强
足电击（FS）
7.获取更多信息并验证预测的转录因子在Meth和Tat相互作用下参与ROS介导的炎症概况
停用拮抗剂
1.通过RNAPol 募集到启动子转录起始位点(TSS)的变化来表明基因的转录活性2.应用Cytoscape聚类策略来揭示基因网络中的协调行为，鉴定其模式
qRT-PCR
荧光显微检测技术/分光光度技术
5.测量与炎症相关的特定基因的mRNA转录水平来进行验证我们的RNAPol ChIP发现/以及测试Tat对基因转录的ROS依赖性作用。
Meth诱导的ROS引起的转录调节变化及促进炎症基因转录
1.用DHE对超氧化物进行可视化处理
FS+D1拮抗剂（SCH23390）
MA SA
ROS诱导的转录因子动态变化调节Meth上调IL1β和TNFα的转录
SS型大鼠
Meth和Tat都增加ROS的产量
（1）斯金纳箱实验：测量每天MA输注次数、MA总摄入量（2）LCED：测量DA及其代谢物水平（3）WB：测量DA代谢酶、DA相关受体、TH及DA相关转运体的表达水平
3.选择与先天免疫氧化代谢和解毒最相关的选定基因进行验证
Meth和Tat的相互作用导致抗氧化基因的转录减少
2.在Meth和Tat刺激下，检测巨噬细胞中与氧化应激相关的基因的表达
生信分析
1.不同刺激下过氧化氢（H2O2）和超氧化物（O2-）的测量
SR型大鼠
1.使用聚焦于人类氧化应激的RT2 Profiler PCR阵列对氧化应激途径基因进行筛选2.用购买的引物进行进一步验证
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