《细胞生物学》细胞生物学研究方法（测试版）
2023-09-02 21:59:51 10 举报AI智能生成
这是测试版一些错误可以改一下请见谅~ 另外这个笔记是基于丁明孝的《细胞生物学》
作者其他创作
大纲/内容
差速离心
密度梯度离心
超离心技术和分离细胞组分
常见的方法
如福耳根反应可以特异性显示紫红色DNA的分布，其原理是酸水解可以除去rna保留dnna病除去DNA上的飘零和糖和剑的飘零，是脱养核塘拳击暴露再利用希夫事迹就可以使它反映橙紫红色
举例
一般是通过显色剂来进行特异性标记通过颜色深浅来判断它的分布和相对含量
细胞的成分和化学显示方法
简言之，就是利用我们的抗体与抗原之间的极高的亲和能力去定位，我们所要寻找的东西
要注意的是，有些抗原的受体比较少，有时我们就可能会用，针对这个抗原的抗体的抗体相当于是把上一个抗体作为抗原，这样能够有更多吸附了荧光的抗体吸附在上面，能够更明显的找到它的分布
免疫荧光技术
一般来说，至少要三次，是因为在进行标记的时候，还要进行洗涤，很有可能会把上面的抗体洗涤下来
概要
免疫铁蛋白技术
免疫酶标技术
再定一下颗粒，容易识别，而且可以制作成不同直径的金颗粒，用于双重标记和多重标记
优点
当下非常常用的手段
免疫胶体金技术
免疫电镜技术
特异性蛋白抗原的定位与定性
是通过将目的DNA中的一条链解下来，并且将带有放射性的DNA与其进行结合，作为探针进行定位与定性
常用的定位和定性方式主要是原位杂交
细胞内特异性核酸的定位与定性
可以定量的测定某一细胞中的DNA rna或某一特异性标记蛋白的含量
但是我提一嘴的是这个细胞分流器非常的贵
技术的过程可以简记为通过某个特定蛋白，对某一个特定的细胞进行标记，而这个特定的细胞可以被液滴充电信号识别不同的细胞被识别之后产生的效果也不同最终会被风雨不同的电荷，最终在通过电场时可被分到一些特定的容器里实现了一些特定的细胞的分类
流式细胞技术
定量细胞化学分析与细胞分选技术
细胞及组分的分析方法
简而言之，就是通过将我们进行基因融合的绿荧光蛋白，在激光的照射下出现了不可逆的失活这种技术主要来观测细胞膜，因为细胞膜拥有的流动的特性，因此失活的蛋白在表现出荧光强度很低的一段时间后，因为流动性的原因，正常的荧光蛋白又会回到曾经失活的位置，使得荧光的强度又逐渐增强，这便是光漂白恢复技术他能够来观测膜质分子的扩散系数和蛋白质的迁移速率
荧光漂白恢复技术
时事直接观测单个分子的反应动力学路径
测量单一分子及分子间的相互作用
捕捉单分子随机过程和分子构象变化的中间态
测量吸发弹重要的信号和分布测量非平衡状态和不同步的体系
功能
是一种利用了单细胞真核生物酵母在体内分析蛋白质与蛋白质的相互作用系统
简单的来说，就是通过两个特定的蛋白质这两个蛋白质需要在一起才能够发挥它特定的作用因此，我们可以利用这个特性既然我们需要的蛋白质组合在它们的上面如果我们组合的蛋白需要结合，那么一旦结合就会使得这两个特定的蛋白发挥其功能，那么我们就可以这样子观察到我们所研究的蛋白是否是通过融合的蛋白
酵母双杂交技术
主要是来检测活细胞内的两种蛋白质是否通过相互作用的重要手段
其基本原理是两个蛋白质，其中一个蛋白质所激发的荧光是蓝光，另一种激发了蛋白质的荧光可能是黄光，因为这两个的荧光的颜色不同，因此他们两个吸收的激发光的频率也就不同，但是如果一旦他们两个是结合氮，一旦集合在一起，那么在发出某一个蛋白质的激发光时，这个时候就会将能量转移给另外一个荧光蛋白，而另外一个荧光蛋白而另一个荧光蛋白吸收能量后便会激发出自己本身的荧光简言之，就是你去激发另一个颜色的荧光，结果却导致了另外一个荧光发光，而你侧的那个荧光却没有发光便可证明我们研究的这两个蛋白是结合蛋白
荧光共振，能量转移技术
该技术已经比较少用了，是因为放射之前有技术需要，有一定的专业技巧，并且它的污染比较大
它是利用的，是同位素的电影射线，对乳胶的感光作用
放射制显影技术
单分子技术与细胞生命活动研究
细胞及生物大分子的动态变化
相较于肉眼光学显微镜的分辨率可以达到0.2微米
光学放大系统
照明系统
进价及样品调节系统
组成部分
可以直接用于观察单细胞生物体或体外培养细胞
常见的固定剂如甲醛
常见的包埋剂如石蜡等
一般包没和固定好后还要进行一定的染色常见的染色剂如苏木精和伊红染色
如果是观察生物组织样品，则需要对其观察的材料进行一个固定和包板
观察类型
光学显微镜
分辨率指的是能够区分两个质点之间的最小距离
如果用光学显微镜去观察的话，一旦染色，那么生物样品就会失去它的生物活性虽然有些染色可以是活细胞染色，但大多数染色都会使他们死亡
那么我们想观察活细胞，就可以借助相差显微镜
当两束光通过光学系统时，会发生相互干涉，如果他们相互相相为相同，那么就会使得他们的光的振幅增大，反之则会减弱。我们通过这种方式去区分样品的立体性从而实现对活细胞的观察
原理
微分干涉显微镜要比相差显微镜要更加高级一些
相差显微镜和微分干涉显微镜
在光学显微镜的水平上，对细胞内特异的蛋白质核酸，糖类，脂质以及等离子组分进行定性的定位研究
概念
荧光染料dap I特异性的直接与细胞中的DNA相结合，从而显出细胞核或染色体在细胞中的定位
也可以通过将绿色荧光基因注入在某一个编码蛋白质的基因中，这样在表达这个蛋白质的同时，也会将绿色荧光蛋白表达出来，同时就起到了一个定位效果
荧光素直接标记法
技术方法
相较于荧光显微镜，激光共焦显微镜能够更加直观的观察相关的定位甚至可以用它来直接观察活细胞的动态
缺点是在于激光的能量更高，更容易使蛋白质上的荧光出现不可逆的失火
荧光显微镜的升级版激光扫描共焦显微镜
荧光显微镜
相较于光学显微镜，它的分辨率达到了0.2纳米
以电子为光源
电子束照明系统
成像系统
真空系统
记录系统
基本构造
厚度一般仅为40到50纳米
超薄切片技术
常用固定剂为二次元和四氧化娥
固定
常用环氧树脂
包埋
，电子显微镜的染色是用重金属盐染色这是因为不同的重金属可以对电子进行吸收，使得在样品上的电子分布不同。在显微镜下看到的就会出现明暗的区别
也就是利用重金属盐进行染色的方式
复染设计术
染色
主要是来观察膜断裂上的蛋白质颗粒和膜表面的形貌特征
冷冻试客技术
也就是我们常说的冷冻电镜技术，适用于分析难以形成三维晶体的膜蛋白以及病毒蛋白质核酸复合物等大型复合物的三维结构
电井酸维重构与低温电镜技术
涉及到的技术
电子显微镜
通过扫描可以得到药品表面的立体图像信息，便是扫描电镜技术
扫描电竞技术
细胞形态结构的观察方法
指的是在机体取出后立即培养的细胞
首先，取出健康的物质组织
再有浓度与活性适中的移酶，或者是胶原蛋白酶与切合剂，等于细胞连接处进行消化分散
给予良好的营养液与无菌的培养环境接近体温与体内PH值
在培养中进行静止或慢速的专门培养但要注意的是，不论用哪一种培养液，都一般要加入一定量的小牛血清，这样细胞才能够很好的贴壁生长与分裂
最后分散的细胞悬液在培养中很快就能够贴敷到屏蔽上
元代细胞培养步骤
而这些会嘎掉的细胞，也被称为有限细胞系
而那些死不掉的细胞，就被叫做永生细胞谢
午马这些存活下来的细胞称为细胞系，因为他们仍保持原来染色体的两倍数量，和接触抑制行为
通常的原代细胞一般来说，传到时代之后就会出现生长停滞，然后最终衰老死亡。只有少数的可以挺过去，并且呢，能够复制到40到50次，不过依旧会死掉
原代细胞
这指的是元代细胞培养后增殖的细胞
传代细胞
体外培养
动物细胞培养
寄到动物细胞融合常用于促溶剂的灭活病毒或者化学物质等等
基因型相同的细胞融合被称为同合体
进行不同的细胞融合，被称为一合体
两个或多个细胞融合成一个双核和多核细胞的现象，我把称为叫做细胞融合
咱们都知道癌细胞是拥有永生细胞系的细胞因此，拥有癌细胞的细胞能够永久的存活下去而不拥有癌细胞的细胞则会死亡用这种方式可以将融合的细胞与癌细胞分离出来而癌细胞无法在有一些特定的培养基中存活，因此我们可以利用这种方式将癌细胞与我们细胞融合的细胞分开，就能得到我们想要的细胞
单体克隆技术。其实简而言之，就是通过细胞融合的方式将癌细胞与淋巴细胞进行融合
细胞融合与单体克隆抗体技术
其实这个技术非常简单，想必大家都应该知道克隆羊多利的故事，克良多利的由来就是由这个技术产生的，如果大家还不了解的话，可以去查一下资料
显微操作技术与动物克隆
细胞培养
细胞培养与细胞工程
细胞生物学研究方法
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