糖和苷
2024-05-27 12:59:56 0 举报AI智能生成
糖和苷
作者其他创作
大纲/内容
糖和苷的提取分离
物理性质
单糖
羟基多，极性大，易溶于水。难溶于低极性的有机溶剂，
呈晶形，有甜味
呈晶形，有甜味
低聚糖
与单糖性质相似。
多糖
随着聚合度的增加，性质与单糖相差越来越大。多为无
定形粉末，无甜味，一般不具还原性，有旋光活性，可
水解成单糖，在水中的溶解度常随分子量的增加而降低
定形粉末，无甜味，一般不具还原性，有旋光活性，可
水解成单糖，在水中的溶解度常随分子量的增加而降低
提取
提取糖和苷类，一般都是利用水或醇进行抽提。
➢提取原生苷：抑制酶活性（植物体内，苷类常与水解苷类的酶共存）
✓新鲜药材，速干，冷冻保存。
✓先用碳酸钙拌和后再用沸水提取。
✓提取时宜用甲醇、乙醇或沸水。
✓同时提取过程中要尽量勿与酸或碱接触，以免苷类水解，如不
加注意，则往往提到的就不是原生苷
✓新鲜药材，速干，冷冻保存。
✓先用碳酸钙拌和后再用沸水提取。
✓提取时宜用甲醇、乙醇或沸水。
✓同时提取过程中要尽量勿与酸或碱接触，以免苷类水解，如不
加注意，则往往提到的就不是原生苷
➢提取次生苷
✓30～40℃水浸24h以上，再用醇提取
✓加防腐剂
✓不能直接用醇提取
✓30～40℃水浸24h以上，再用醇提取
✓加防腐剂
✓不能直接用醇提取
分离
季铵盐沉淀法
根据长链季铵盐能与酸性多糖形成不溶性多糖化合物的特性，以分
离酸性和中性多糖
离酸性和中性多糖
分级沉淀或分级溶解
多糖水提取液适当浓缩后，加入一定量的乙醇（丙酮）至不同的浓
度，使多糖分级沉淀，得到不同的多糖组分。
度，使多糖分级沉淀，得到不同的多糖组分。
离子交换法
利用不同多糖分子电荷密度不同，而与离子交换剂中的离子
或某些基团发生电性结合
或某些基团发生电性结合
亲和力随多糖结构与电离性质而异，一般随着分子中酸性基团
的增加而增强：
线状分子分子量较大的多糖亲和力较强；
直链多糖较支链多糖更易吸附。
常用离子交换剂树脂类、纤维素类和葡聚糖类。
的增加而增强：
线状分子分子量较大的多糖亲和力较强；
直链多糖较支链多糖更易吸附。
常用离子交换剂树脂类、纤维素类和葡聚糖类。
阳离子交换柱层析法适用于各种酸性、中性多糖和黏多糖的分离纯
化。
在pH6.0时，酸性多糖能吸附于交换介质上，中性多糖不能吸附，
然后用pH相同但离子强度不同的缓冲溶液将酸性强弱不同的酸性多糖
分别洗脱下来。但如果柱子为碱性，则中性多糖也能吸附。
中性多糖能与硼砂形成络合物，所以可将柱子处理成硼砂型的，用
不同浓度的硼砂溶液洗脱，也能将不同的中性多糖分离开来
化。
在pH6.0时，酸性多糖能吸附于交换介质上，中性多糖不能吸附，
然后用pH相同但离子强度不同的缓冲溶液将酸性强弱不同的酸性多糖
分别洗脱下来。但如果柱子为碱性，则中性多糖也能吸附。
中性多糖能与硼砂形成络合物，所以可将柱子处理成硼砂型的，用
不同浓度的硼砂溶液洗脱，也能将不同的中性多糖分离开来
纤维素柱色谱
同纸色谱，水或不同浓度稀醇洗脱，极性大者先出。
凝胶柱色谱
① 常用的凝胶有葡聚糖凝胶Sephadex（G-50、G-75、G-150等），
琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。
② 大分子多糖先流出，小分子多糖后流出。
③ 以不同浓度的盐溶液和缓冲液作为洗脱剂，其离子浓度不低于
0.02mol/L，通过凝胶柱层析多糖可分为不同分子大小的糖。本法
除进行多糖分级外，还可以用于小分子杂质的去除，或者在乙醇
沉淀法进行分级后，再根据分子大小进一步分级
琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。
② 大分子多糖先流出，小分子多糖后流出。
③ 以不同浓度的盐溶液和缓冲液作为洗脱剂，其离子浓度不低于
0.02mol/L，通过凝胶柱层析多糖可分为不同分子大小的糖。本法
除进行多糖分级外，还可以用于小分子杂质的去除，或者在乙醇
沉淀法进行分级后，再根据分子大小进一步分级
制备性区域电泳
多糖分子大小、形状及所负电荷不同而在电场作用
下向两极迁移的速度不同
下向两极迁移的速度不同
糖的化学性质
氧化反应
过碘酸反应
适用范围：
邻二醇、α-氨基醇、α-羟基醛(酮)、α-羟基酸、
邻二酮、酮酸和某些活性次甲基。
作用缓和，选择性高。
邻二醇、α-氨基醇、α-羟基醛(酮)、α-羟基酸、
邻二酮、酮酸和某些活性次甲基。
作用缓和，选择性高。
反应特点：
① 对开裂邻二醇羟基反应定量进行（试剂与反应物基本
是1:1）；
② 在水溶液中进行或有水溶液（否则不反应）；
③ 中性或弱酸性条件下对邻二醇羟基的反应速度：
顺式>反式 （因顺式易形成环式中间体）；
① 对开裂邻二醇羟基反应定量进行（试剂与反应物基本
是1:1）；
② 在水溶液中进行或有水溶液（否则不反应）；
③ 中性或弱酸性条件下对邻二醇羟基的反应速度：
顺式>反式 （因顺式易形成环式中间体）；
应用：通过测定HIO4的消耗量及最终产物：
① 推测分子中邻二醇羟基数目；试剂与反应物基本是1:1，一个邻二醇，消耗一分子过碘酸；
② 同一分子式的糖，推测是吡喃糖还是呋喃糖③推测1,3连接还是1,4连接（糖与糖连接的位置
① 推测分子中邻二醇羟基数目；试剂与反应物基本是1:1，一个邻二醇，消耗一分子过碘酸；
② 同一分子式的糖，推测是吡喃糖还是呋喃糖③推测1,3连接还是1,4连接（糖与糖连接的位置
四醋酸铅反应
反应机制和过碘酸相似，作用能力比过碘酸强；
➢对立体结构要求更严格，两个邻羟基必须处在同一平
面上才能较快作用。
➢需在非水溶液如醋酸、二氧六环等溶剂中进行；
➢对立体结构要求更严格，两个邻羟基必须处在同一平
面上才能较快作用。
➢需在非水溶液如醋酸、二氧六环等溶剂中进行；
糖醛形成反应
➢单糖在浓酸(4～10N) 加热作用下，脱去三分子水，生成具有呋
喃环结构的糠醛类衍生物。
喃环结构的糠醛类衍生物。
形成反应：五碳糖糠醛→（R=H），
甲基五碳糖→5-甲基糠醛（R=Me)，
六碳糖→5-羟甲基糠醛(R=CH2OH )，
六碳糖醛酸→5-羧基糠醛(R=COOH ) 。
甲基五碳糖→5-甲基糠醛（R=Me)，
六碳糖→5-羟甲基糠醛(R=CH2OH )，
六碳糖醛酸→5-羧基糠醛(R=COOH ) 。
Molisch试剂：浓硫酸和α-萘酚。
Molisch反应：样品+α-萘酚+浓H2SO4→棕色环
Molisch反应：样品+α-萘酚+浓H2SO4→棕色环
羟基反应
缩醛和缩酮化反应
醛或酮在脱水剂作用下易与具有适当空间的1,3-二醇羟基或邻
二醇羟基生成环状的缩醛（acetal）或缩酮（ketal）
二醇羟基生成环状的缩醛（acetal）或缩酮（ketal）
与硼酸的络合反应
具有适当空间位置的糖的邻二羟基（1,2）或1,3-二羟基可与
硼酸形成五元或六元环状络合物。
硼酸形成五元或六元环状络合物。
苷键的裂解
酸催化水解
影响水解反应因素：
1. 苷原子的碱度，即苷原子上的电子云密度。碱性越强，越
易水解。
2. 苷原子的空间环境。
1. 苷原子的碱度，即苷原子上的电子云密度。碱性越强，越
易水解。
2. 苷原子的空间环境。
难易顺序
：C-苷> S-苷> O-苷> N-苷
：C-苷> S-苷> O-苷> N-苷
糖的形式 呋喃糖苷>>吡喃糖苷
糖的种类 酮糖>醛糖
乙酰解反应
1.常用试剂：醋酐+ 酸
酸：H2SO4、HClO4、CF3COOH或Lewis酸（ZnCl2、BF3）
2.反应条件：一般是在室温放置数天。
3.反应机理：
与酸催化水解相似，以CH3CO+(乙酰基，Ac）为进攻基团。
酸：H2SO4、HClO4、CF3COOH或Lewis酸（ZnCl2、BF3）
2.反应条件：一般是在室温放置数天。
3.反应机理：
与酸催化水解相似，以CH3CO+(乙酰基，Ac）为进攻基团。
碱催化水解和β-消除反应
一般的苷对碱是稳定的，不易被碱催化水解，故多数苷是采
用稀酸水解。
但，酯苷、酚苷、氰苷、与羰基共轭的烯醇苷和β-吸电子基
取代的苷易为碱所水解。
用稀酸水解。
但，酯苷、酚苷、氰苷、与羰基共轭的烯醇苷和β-吸电子基
取代的苷易为碱所水解。
β-消除反应：
由于苷键β位吸电子基团能使苷元α位氢活化，有利于OH-的
进攻，故苷键的β位有吸电子基取代的苷在碱液中可与苷键发
生消除反应而开裂苷键，此反应称为β-消除反应。
由于苷键β位吸电子基团能使苷元α位氢活化，有利于OH-的
进攻，故苷键的β位有吸电子基取代的苷在碱液中可与苷键发
生消除反应而开裂苷键，此反应称为β-消除反应。
β-消除反应作用机理：
在1→3或1→4连接的聚糖中，还原端的游离醛（或酮）邻位氢活化而与3-O-或4-O-苷键起消除反应。这样碱能使多糖还原端的单糖逐个被剥落，对非还原端则无影响。剥落生成的是α羟基糖酸
在1→3或1→4连接的聚糖中，还原端的游离醛（或酮）邻位氢活化而与3-O-或4-O-苷键起消除反应。这样碱能使多糖还原端的单糖逐个被剥落，对非还原端则无影响。剥落生成的是α羟基糖酸
酶催化水解反应
1. 反应专属性强、选择性高
2. 条件温和，苷元结构不变
3. 可以获知苷键的构型
4. 保留部分苷键得到次级苷或低聚糖，以便获知苷元和糖糖和糖之间的连接方式
2. 条件温和，苷元结构不变
3. 可以获知苷键的构型
4. 保留部分苷键得到次级苷或低聚糖，以便获知苷元和糖糖和糖之间的连接方式
过碘酸裂解反应
用过碘酸氧化1,2-二元醇的反应可以用于苷键的水解，
称为Smith裂解，是一种温和的水解方法。
试剂： 过碘酸钠(NaIO4)、四氢硼钠(NaBH4)、稀酸
称为Smith裂解，是一种温和的水解方法。
试剂： 过碘酸钠(NaIO4)、四氢硼钠(NaBH4)、稀酸
Smith裂解特点：
① 水解条件温和。
② 适应于苷元不稳定的苷以及C-苷的水解。
③ 此方法不适用于苷元上也有1,2-二元醇结构的苷类。
④ 可得到原苷元
（除酶解外，其它方法可能得到的是次级苷元）
① 水解条件温和。
② 适应于苷元不稳定的苷以及C-苷的水解。
③ 此方法不适用于苷元上也有1,2-二元醇结构的苷类。
④ 可得到原苷元
（除酶解外，其它方法可能得到的是次级苷元）
应用
① 苷元不稳定的苷，以及碳苷用此法进行水解，可得到完整的
苷元，这对苷元的研究具有重要的意义；
② 推测糖与糖的连接方式及氧环的大小；
③ 此外，从降解得到的多元醇，还可确定苷中糖的类型：
① 苷元不稳定的苷，以及碳苷用此法进行水解，可得到完整的
苷元，这对苷元的研究具有重要的意义；
② 推测糖与糖的连接方式及氧环的大小；
③ 此外，从降解得到的多元醇，还可确定苷中糖的类型：
糠醛酸苷的选择性水解反应
糖
糖的定义
多羟基醛酮 碳水化合物
糖的聚合程度分类
单糖
五碳醛糖
六碳醛糖
六碳酮糖
去氧糖
寡糖
由2-9个单糖结合而成的直联或支链糖
分类
按单糖基个数
二糖，三塘，四糖等
有无游离的酮基或醛基分
还原糖
非还原糖
多糖
10个以上的糖单元组成
按单糖组成分类
均多糖
杂多糖
按功能分
直联型（不溶于水）
支链型（溶于热水）
单糖的结构表示
Fischer投影式
糖处游离状态时用Fischer式表示
根据离羰基最远的手性碳原子的构型来确定D型／L型
haworth透视式
苷化后成环用Haworth式表示
优势构象式
苷类
苷的定义
苷类
(glycosides), 又称苷或配糖体，
是由糖或糖的衍生物与另一非糖物质（称为苷元或糖苷配基）通过糖的半缩醛或半缩酮羟基与苷元脱水形成的一类化合物。
糖的半缩醛半缩酮OH与苷元的H脱水。
(glycosides), 又称苷或配糖体，
是由糖或糖的衍生物与另一非糖物质（称为苷元或糖苷配基）通过糖的半缩醛或半缩酮羟基与苷元脱水形成的一类化合物。
糖的半缩醛半缩酮OH与苷元的H脱水。
子主题
苷的分类
生物体内的存在形式
原生苷，次生苷
连接单糖基的个数
单糖苷、二糖苷、三糖苷…
苷元连接糖基的位置数
单糖链苷、二糖链苷...
苷键原子
氧苷
醇苷
通过苷元上醇羟基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱一
分子水缩合而成的化合物。
分子水缩合而成的化合物。
如：皂苷，强心苷。
酚苷
通过苷元上的酚羟基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱一
分子水缩合而成的化合物。
分子水缩合而成的化合物。
如：皂苷，强心苷。
氰苷
主要指一类具α-羟腈基的苷元与糖组成的氰苷。多数具有水溶性，
不易结晶，容易水解，其特性是经酶作用生成的苷元α-羟基腈很不稳
定，立即分解为醛（酮）和HCN。而在碱性条件下苷元易发生异构化。
α-羟基腈，又称氰醇(cyanoalcohol)。
不易结晶，容易水解，其特性是经酶作用生成的苷元α-羟基腈很不稳
定，立即分解为醛（酮）和HCN。而在碱性条件下苷元易发生异构化。
α-羟基腈，又称氰醇(cyanoalcohol)。
酯苷
通过苷元上的羧基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱
一分子水缩合而成的化合物
一分子水缩合而成的化合物
吲哚苷
指羟基吲哚的醇羟基和糖形成的苷
硫苷
通过苷元上的巯基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟
基脱一分子水缩合而成的化合物
基脱一分子水缩合而成的化合物
氮苷
通过苷元上的胺基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基
脱一分子水缩合而成的化合物
脱一分子水缩合而成的化合物
碳苷
通过苷元碳上的氢与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱水缩合而成的化合物。
子主题
子主题
糖的核磁共振
糖的1H-NMR性质
一般在1H-NMR谱中：
➢ 糖端基质子信号在δ4.3-6.0；
➢ 其余部分在δ3.2-4.2左右；
➢ 甲基五碳糖的甲基信号在δ1.0左右。
➢ 糖端基质子信号在δ4.3-6.0；
➢ 其余部分在δ3.2-4.2左右；
➢ 甲基五碳糖的甲基信号在δ1.0左右。
化学位移
(1) 端基质子：δ4.3～6.0ppm左右，d峰 容易辨认
① 确定糖基的个数
② 确定糖基的种类
③ 糖的连接位置的判断
④ 2D-NMR谱上糖信号归属的起点
① 确定糖基的个数
② 确定糖基的种类
③ 糖的连接位置的判断
④ 2D-NMR谱上糖信号归属的起点
(2)甲基五碳糖的甲基信号：δ1.0ppm左右
✓ 特点：比较容易辨认
✓ 用途：
① 确定甲基五碳糖的个数
② 确定甲基五碳糖的种类
③ 确定甲基五碳糖的位置
④ 2D-NMR谱上甲基五碳糖信号归属的起点
✓ 特点：比较容易辨认
✓ 用途：
① 确定甲基五碳糖的个数
② 确定甲基五碳糖的种类
③ 确定甲基五碳糖的位置
④ 2D-NMR谱上甲基五碳糖信号归属的起点
（3）其它质子：δ3.2～4.2ppm
✓特点: 信号集中,难以解析
✓归属: 往往需借助2D-NMR技术
✓特点: 信号集中,难以解析
✓归属: 往往需借助2D-NMR技术
偶合常数
可通过端基质子的偶合常数，来判断苷键的构型。
✓α构型：J = 2～4Hz
✓β构型：J = 6～8Hz
✓α构型：J = 2～4Hz
✓β构型：J = 6～8Hz
糖的13C-NMR性质
化学位移及偶合常数
1. CH3：δ18ppm 甲基五碳糖的C6
一般有几个信号(扣除苷元中的甲基)可表示有几个甲基五碳糖存在。
2. CH2OH：δ62ppm左右 C5或C6
3. CHOH：δ68～85ppm 糖氧环上的C2～C4
4. 端基C：δ95～105ppm
在此范围内，有几个信号，可视为有几种糖存在于糖链中
常见糖中:
➢β-D型和α-L型苷键的端基碳
➢α-D型和β-L型苷键的端基碳
δ>100ppm；
δ<100ppm
一般有几个信号(扣除苷元中的甲基)可表示有几个甲基五碳糖存在。
2. CH2OH：δ62ppm左右 C5或C6
3. CHOH：δ68～85ppm 糖氧环上的C2～C4
4. 端基C：δ95～105ppm
在此范围内，有几个信号，可视为有几种糖存在于糖链中
常见糖中:
➢β-D型和α-L型苷键的端基碳
➢α-D型和β-L型苷键的端基碳
δ>100ppm；
δ<100ppm
苷化位移
糖与苷元成苷后，苷元的α-C、β-C和糖的端基碳化学位移值均发
生了改变，这种改变称苷化位移。
生了改变，这种改变称苷化位移。
苷化位移用于推测：
➢糖与苷元的连接位置；
➢糖与糖的连接位置；
➢某些苷元被苷化碳的绝对构型；
➢碳氢信号归属
➢糖与苷元的连接位置；
➢糖与糖的连接位置；
➢某些苷元被苷化碳的绝对构型；
➢碳氢信号归属
伯醇苷
伯醇苷 苷与苷元相比
α-C向低场位移约5～7ppm，
β-C向高场位移约4ppm；苷与该糖的甲苷
相比，端基碳向高场位移约1～2ppm。
α-C向低场位移约5～7ppm，
β-C向高场位移约4ppm；苷与该糖的甲苷
相比，端基碳向高场位移约1～2ppm。
环仲醇苷
两个β-C均为仲碳的苷
糖与两个β-C均为仲碳的仲醇成苷后，苷与苷元相比α-C向低场位
移约5～7ppm，糖与该糖的甲苷相比，端基碳向高场位移约1～4ppm。
其β-C的苷化位移与糖端基碳的构型有关。
当糖的端基碳的构型为R 时，pro-S 和pro-R 碳分别向高场位移
~4 和~2；当构型为S 时，则与之相反
移约5～7ppm，糖与该糖的甲苷相比，端基碳向高场位移约1～4ppm。
其β-C的苷化位移与糖端基碳的构型有关。
当糖的端基碳的构型为R 时，pro-S 和pro-R 碳分别向高场位移
~4 和~2；当构型为S 时，则与之相反
一个β-C为仲碳，另一个β-C为叔碳或季碳的苷：
苷元α-C的绝对构型和糖端基碳绝对构型相同时，（都为R或
S），α-C向低场位移约5ppm，糖端基向高场位移约4ppm
S），α-C向低场位移约5ppm，糖端基向高场位移约4ppm
苷元α-C和糖端基碳绝对构型不同（R，S 或S，R）时，α-C
向低场位移约10ppm
向低场位移约10ppm
叔醇苷
糖与叔醇成苷后，其α-C向低场位移约7ppm，β-C向高场位移约
3ppm；糖的端基碳向高场位移约7ppm。
3ppm；糖的端基碳向高场位移约7ppm。
酯苷、酚苷的苷化位移
当糖与-OH形成酯苷键或酚苷键时，其苷化位移值较特殊，端基碳
和苷元α-碳均向高场位移, β-C向低场位移。
和苷元α-碳均向高场位移, β-C向低场位移。
糖链的结构测定
一.纯度测定
纯品：一定分子量范围的均一组分。
➢超离心法：密度梯度
➢高压电泳法：与硼酸络合
➢超离心法：密度梯度
➢高压电泳法：与硼酸络合
二． 分子量的测定
质谱分析
现多采用化学电离质谱(CI-MS)、场解吸质谱(FD-MS)、快原子轰击
质谱(FAB-MS)和电喷雾电离质谱(ESI-MS)等方法来获得分子离子蜂
或伪分子离子峰，尤其是ESI-MS及FAB-MS两种质谱法更是目前测定
苷类分子量常用的方法
质谱(FAB-MS)和电喷雾电离质谱(ESI-MS)等方法来获得分子离子蜂
或伪分子离子峰，尤其是ESI-MS及FAB-MS两种质谱法更是目前测定
苷类分子量常用的方法
三． 单糖的鉴定
多糖的完全水解
常用稀酸水解，注意掌握适合的条件使多聚糖完全水解，又不
使水解下来的单糖变化或重新聚合。
常用稀酸水解，注意掌握适合的条件使多聚糖完全水解，又不
使水解下来的单糖变化或重新聚合。
糖的纸色谱（ PC）
糖类的PC常用的展开剂大多为含水的溶剂系统，其中以正丁
醇-醋酸-水和用水饱和的苯酚两种系统应用得最普遍。
正丁醇-醋酸-水（BAW，4:1:5）
上层（水饱和的正丁醇层）
糖类的PC常用的展开剂大多为含水的溶剂系统，其中以正丁
醇-醋酸-水和用水饱和的苯酚两种系统应用得最普遍。
正丁醇-醋酸-水（BAW，4:1:5）
上层（水饱和的正丁醇层）
糖的薄层色谱
糖类硅胶薄层色谱常用的展开剂为
正丁醇-丙酮-水、
正丁醇-醋酸-水、
正丁醇-吡啶-水
正丁醇-丙酮-水、
正丁醇-醋酸-水、
正丁醇-吡啶-水
糖的PC或TLC所用的显色剂有些是相同的；
苯胺-邻苯二甲酸试剂
间苯二酚-盐酸试剂
苯胺-邻苯二甲酸试剂
间苯二酚-盐酸试剂
有些显色剂中含有硫酸，因此只能用于TLC。
α-萘酚+浓硫酸试剂，喷后一般要在100℃左右加热数分钟至斑点
显现。
以CMC-Na为粘合剂的硅胶薄层板，在使用含浓硫酸的显色剂时亦
应注意加热的温度与时间
α-萘酚+浓硫酸试剂，喷后一般要在100℃左右加热数分钟至斑点
显现。
以CMC-Na为粘合剂的硅胶薄层板，在使用含浓硫酸的显色剂时亦
应注意加热的温度与时间
糖的气相色谱及气质联用色谱
糖的离子交换色谱
四． 单糖绝对构型的测定
1. GC法
2. HPLC法
3. 手性柱色谱法
4. 手性检测器法
5. 旋光比较法
2. HPLC法
3. 手性柱色谱法
4. 手性检测器法
5. 旋光比较法
GC法
➢同一种单糖的D型和L型是一对对映体的关系，常规分离手段不能将
其分开。如果在其分子中引入一个同种构型的新的手性中心，这对
对映体就变成了非对映体，常规分离手段就能将其分开。
➢通过GC比较被测单糖衍生物与标准单糖D型和L型单糖衍生物的比
移值（非对映异构体，GC上可分开），就可以确定被测单糖的绝对构型
➢ HPLC法：原理同GC法，手性试剂有所不同。
➢ 手性柱色谱法：特殊手性柱
➢ 手性检测器法：同种糖，对映体旋光相反。
➢ 旋光比较法：全水解得单糖，测旋光
➢同一种单糖的D型和L型是一对对映体的关系，常规分离手段不能将
其分开。如果在其分子中引入一个同种构型的新的手性中心，这对
对映体就变成了非对映体，常规分离手段就能将其分开。
➢通过GC比较被测单糖衍生物与标准单糖D型和L型单糖衍生物的比
移值（非对映异构体，GC上可分开），就可以确定被测单糖的绝对构型
➢ HPLC法：原理同GC法，手性试剂有所不同。
➢ 手性柱色谱法：特殊手性柱
➢ 手性检测器法：同种糖，对映体旋光相反。
➢ 旋光比较法：全水解得单糖，测旋光
五． 糖连接位置的测定
1. 将糖链全甲基化→水解→甲基化单糖的定性和定量（气相层析）
可以获知被测物中含有的糖的类型、甲基化的位置及相互之间的分子
比等。
（1）甲基化单糖中游离-OH的部位就是连接位置；
（2）全甲基化的单糖即是末端糖。
比等。
（1）甲基化单糖中游离-OH的部位就是连接位置；
（2）全甲基化的单糖即是末端糖。
2. 13C-NMR测定：
主要归属各碳信号，以确定产生苷化位移的碳。
糖与苷元：2D-NMR谱（ HMBC谱）
可以观察到糖的端基质子与苷元α-碳信号以及苷元α-碳原子上的质
子与糖的端基碳信号之间出现相关峰，据此可确定糖与苷元的连接位
置
糖与苷元：2D-NMR谱（ HMBC谱）
可以观察到糖的端基质子与苷元α-碳信号以及苷元α-碳原子上的质
子与糖的端基碳信号之间出现相关峰，据此可确定糖与苷元的连接位
置
六． 糖连接顺序的确定
1.缓和水解法：
将糖链水解成较小的片段，部分酸水解产物的基本结构具有代表性。
然后分析这些低聚糖的连接顺序
将糖链水解成较小的片段，部分酸水解产物的基本结构具有代表性。
然后分析这些低聚糖的连接顺序
2.多糖的碱水解
3. 质谱分析
FAB-MS: 从末端糖依次打掉
FAB-MS: 从末端糖依次打掉
4. 2D-NMR
H-H COSY, HMQC, HMBC, NOESY, HOHAHA
H-H COSY, HMQC, HMBC, NOESY, HOHAHA
七． 苷键构型及氧环的确定
1. 酶催化水解方法
2. 1H-NMR判断糖苷键的相对构型
可通过C1-H与C2-H的偶合常数，来判断苷键的构型（α、β）。
3. 13C-NMR:JC1-H1
α-D或β-L型苷键J=170～175 Hz
β-D或α-L型苷键J=160～165 Hz
4. 糖的红外波谱
多糖在960cm-1～1500cm-1范围内有许多吸收峰，确定苷
键构型上主要观察730cm-1～960cm-1
α-吡喃糖，δC1-H在845 cm-1；
β-吡喃糖，δC1-H在890 cm-1
2. 1H-NMR判断糖苷键的相对构型
可通过C1-H与C2-H的偶合常数，来判断苷键的构型（α、β）。
3. 13C-NMR:JC1-H1
α-D或β-L型苷键J=170～175 Hz
β-D或α-L型苷键J=160～165 Hz
4. 糖的红外波谱
多糖在960cm-1～1500cm-1范围内有许多吸收峰，确定苷
键构型上主要观察730cm-1～960cm-1
α-吡喃糖，δC1-H在845 cm-1；
β-吡喃糖，δC1-H在890 cm-1
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